布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
【介紹】
布魯氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)牛、羊、豬、犬等動(dòng)物血清中的布魯氏菌抗體。
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被布魯氏菌抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋液、待檢血清與酶結(jié)合物，經(jīng)過(guò)溫育后，若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體，則與酶結(jié)合物中的酶標(biāo)記抗體競(jìng)爭(zhēng)板孔中包被的抗原表位，溫育后將多余的游離抗體通過(guò)洗滌去除；在微孔中加入TMB顯色液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
【組份】

1	抗原預(yù)包被板條	1/2塊	7	終止液	6/11ml
2	酶結(jié)合物	10/20ml	8	陰性對(duì)照	200ul
3	10倍濃縮洗滌液	100ml	9	陽(yáng)性對(duì)照	60ul
4	顯色液	11/22ml	10	封板膜	2/4張
5	樣本稀釋液	100ml	11	說(shuō)明書(shū)	1份
6	稀釋板	1/2塊

 
【需自備的設(shè)備及試劑】
1. 微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶標(biāo)儀。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機(jī)。
 
【樣品制備】
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【注意事項(xiàng)】
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
2. 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3. 顯色液和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得最好的結(jié)果。操作過(guò)程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精確。
8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用； 
【操作步驟】
1. 在稀釋板上按1：40稀釋待檢血清樣本以及陰陽(yáng)性對(duì)照品（195μl樣本稀釋液+5μl樣本血清），并吹打均勻
2. 取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開(kāi)分次使用），將稀釋好的待檢血清取20μl加入到檢測(cè)板孔內(nèi)。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照2孔，陽(yáng)性對(duì)照1孔，取陰性及陽(yáng)性稀釋液各20μl分別加入反應(yīng)孔中。
3. 然后再加酶結(jié)合物80μl/孔，加入反應(yīng)孔中輕微震蕩混勻（勿溢出），蓋上封板膜，置37℃溫育60分鐘。
4. 小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。
5. 每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
6. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度OD值。
試驗(yàn)成立的條件是：
 陰性對(duì)照(N)OD值>0.5，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照(P)阻斷率>80%；
計(jì)算方法：
PI (阻斷率)= {1 —（樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值）}×100%
陰陽(yáng)性判斷：
PI(阻斷率)>70%則判斷為陽(yáng)性；
PI≤70%則判斷為陰性。
【有限期】
貯存方法： 2 - 8oC下貯存。
有效期： 12個(gè)月。