中文名稱：豚鼠骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：豚鼠骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
鼠骨髓中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書中文別名：豚鼠骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | |
| A | 分離液 1 | 200ml | |
| B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液（贈(zèng)品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | 紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品） | NH4CL2009 | 100ml |
| E | 紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉） | HES-TBD550-80 | 80ml |
| F | 試劑 F | F2013TBD | 200ml |
| G | 說(shuō)明書 | 1 份 | |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
- 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“鼠骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
- 取一支 15ml 離心管，先加入分離液 1：3ml，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：
樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
- 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上，650-800g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。
- 離心后，稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。
- 離心后棄上清，后可通過(guò)兩種方法去除紅細(xì)胞。
方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書”）。
方法二：
1. 細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸，加于 3ml 分離液 1 之液面上，400g 離心 20min。
- 取白色環(huán)狀細(xì)胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復(fù)洗滌 2-3 次，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）。
分離圖例
【注意事項(xiàng)】
- 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
- 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
- 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時(shí)，分離效果更佳。
- 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.
- 請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
- 骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
| 出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
| 離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
| 離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | |
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過(guò)大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) | 細(xì)胞密度過(guò)小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
- 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果，
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。
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