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大鼠外周血血小板分離液試劑盒
產品編號:PLA2011RAT
別名 大鼠外周血血小板分離液試劑盒 
英文名  
大鼠外周血血小板分離液試劑盒
中文名稱:大鼠外周血血小板分離液試劑盒
中文別名:大鼠外周血血小板分離液試劑盒

產品類別:血小板的分離
 
產品編號:PLA2011RAT
 
產品名稱:大鼠外周血血小板分離液試劑盒
 
產品規格:200ml/KIT
 
產品價格:¥500.00元
 
本品用于分離大鼠外周血血小板


“XXXX”動物外周血血小板分離液實驗方法
 
技術文檔編號:TBD0049SOP
 
【產品規格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
 
  名稱 產品編號 規格
       
A XXXX 動物外周血血小板分離液   200ml
       
B 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
方法一:
 
  • 在 15ml 離心管中,首先取抗凝血加于分離液之液面上(抗凝血與分離液最佳比例 1:2), 250-300g ,離心 15min(注:根據血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血小板血漿層。第二層為環狀乳白色細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
  • 用吸管小心吸取第一層血小板血漿層到另一 15ml 離心管中,往所得離心管中加入同體積樣本稀釋液(產品編號:2010C1119),混勻血小板(如需獲得的富集血小板血漿則不需加入稀釋液,直接取血漿層即得)。
 
  • 500g,離心 20min,離心后棄上清。
 
  • 向含有血小板沉淀的離心管中加入 10ml 清洗液(產品編號:2010X1118)混勻,離心450g,15min,棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸目的細胞。
方法二(需獲得血小板富集血漿的客戶請勿選擇此方法)
 
1. 在 15ml 離心管中,先加入 4ml 分離液,再將分離液與樣本稀釋液 8:2 混合的液體 1ml
 
小心疊加于分離液之液面上形成梯度界面。
 
  • 將抗凝血液樣本 2-3ml 小心加于分離液之液面上,400g,離心 20min。
 
  • 離心后,環狀血小板層存在于血漿層中,取血小板層或血漿層(血小板層不明顯時)于另一 15ml 離心管中。
 
  • 后續試驗同方法一中的步驟 5。
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果,最好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
  • 本實驗最好不使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會導致交界處單個核細胞混雜。
 
  • 分離液用量大于血液樣本時,分離效果更佳。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯系技術支持以尋求幫助。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗血小板提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶可適當進行參考。
 
      紅細胞   白細胞   血小板
               
        (4.0-10.0)×109  
  含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 (1.0-3.0)×1011
        50%-70% 20%-40% 3%-8%  
             
【相關實驗技術方案】        
1. 所獲得血小板的酸提取技術。        
2. 所獲得目的細胞的鑒定方法        
    A.流式細胞技術        

B.免疫組化技術
 
C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現情況 出現原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環層彌散 細胞密度過大 調整細胞密度
   
離心后白環層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
 
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。
 
 
 
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