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提供商:         上海研謹生物
服務名稱:       平行反應監測技術(PRM) 實驗服務
服務：            1-2周
規格:           實驗服務
價格：          500元
收費標準/服務周期/提供結果:
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平行反應監測技術(PRM) :
PRM是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測，從而實現對目標蛋白質/肽段進行絕對定量。PRM技術基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質譜平臺，首先
利用四級桿質量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collision cell中對母離子進行碎裂，最后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。
實驗意義:
PRM技術是針對無抗體蛋白的驗證新技術，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數據的驗證，或對復雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析。
實驗步驟:
用PRM進行蛋白質組數據驗證的一般步驟為:
 
結果展示
 
實驗完成周期及交付標準:
1.實驗周期: --般PRM時間為: 5-10天
2.交付標準:
組學驗證:
①主要儀器、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。
③方法學重復性評價:三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) 。
④實驗結果:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。
相對/絕對定量:
①主要儀器、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。
③方法學評價:相對定量的重復性評價-測試樣本的三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;
絕對定量的方法學評價-標準品XIC圖譜，LOD， LOQ,線性范圍， 6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個稀釋度有3次技術重復)。
④實驗結果:
相對定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。
絕對定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，根據標準曲線計算得到的蛋白質濃度值，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。
需確認的信息:
1.樣品:
①如果樣品為蛋白質溶液，蛋白質總量≥300mg;
②如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品，細胞數量≥107個;
③如果是體液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。
2.樣品采集過程中使用到塑料制品時，盡量使用無色進口產品，以減少塑料制品中雜質對質譜檢測的影響。
文獻參考
[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.
 
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